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聚乙二醇(PEG)置換法測定LgG

閱讀次數：1323 發布時間：2013/5/2 10:22:53

聚乙二醇（PEG）置換法
水溶性非離子型聚合物沉淀法常用的聚合物為聚乙二醇（PEG）及右旋糖酐．水溶性聚合物
沉淀蛋白質的機制還不清楚，大致有如下解釋：聚合物與蛋白質形成共沉物；聚合物與蛋白質之間發生水的重分配；聚合物與蛋白質形成復合物．此法受許多因素影響，主要是pH、離子強度、蛋白質濃度和PEG的分子量等．PEG在濃度為3％～4％時可沉淀去除了蛋黃脂磷蛋白及脂質，6％～7％可沉淀IgM，8％～12％沉淀IgG，12％～15％沉淀
其他球蛋白，25％則沉淀自蛋白．在10 mL人血清中加入等量0．025 M pH7．8
的磷酸鹽緩沖液（PBS）后，再加入分子量為1 000的PEG溶液，終濃度為16％，將試樣分別置旋渦混合器上混勻，置冰箱（4℃）過夜，次日離心5～10rain（2 500 rpm），棄上清，沉淀用0．025M pH7．8的PBS溶解，直接上DEAE纖維素柱層析，以0．0175M pH6．3的PBS洗脫．在此條件下分離人IgG其比活性為0．95 mg／mg蛋自質，活性回收率為95％n引．

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