上月底時，來自吉林大學(xué)的齊老師參與了我公司的優(yōu)惠活動，購買人凝血因子elisa試劑盒。日前，齊老師帶著一些相關(guān)產(chǎn)品使用的疑問咨詢到了錢經(jīng)理：“請問，用于免疫接種的抗原應(yīng)如何制備呢？” 錢經(jīng)理答道：抗原應(yīng)溶解在緩沖溶液。不溶性抗原和可溶性的一樣好。理想的抗原濃度是1mg/ml，然而較低濃度也可以接受的。您也可以把含有目標(biāo)蛋白的SDS-PAGE膠發(fā)給我們，將膠放于水中變脫色，因為醋酸能使得蛋白質(zhì)進一步地變性。
對此，還要注意避免：對動物有毒的添加劑。可接受：低量的SDS、咪唑、尿素、胍，非離子型去污劑，EDTA或EGTA和聚丙烯酰胺。添加的*終的量在很大程度上取決于樣本體積/抗原濃度。
齊老師繼續(xù)問道：“選擇哪個物種用于免疫接種？”
使用IgG和IgY抗體針對同一抗原的優(yōu)勢：①獨立確認預(yù)期的目標(biāo)蛋白質(zhì)被檢測。②抗體庫具有不同的特性，在不同的技術(shù)中能起到互補的作用雙重染色。③一般從遺傳角度上選擇與抗原有較遠的親源關(guān)系的物種用于免疫接種。 回答了以上兩個問題之后，齊老師這些又問出了四個常見問題，上海恒遠錢經(jīng)理都一一仔細回復(fù)。
1. 問：在我開始實驗前可以測試來源于一些動物的免疫前血清或卵黃嗎？
答：按照您的要求，在您開始您的實驗前Agrisera會送你幾個免疫前血清或卵黃樣品。您可以選擇具有背景信號的動物用于測試。
2. 問：在兔子中生產(chǎn)的抗體比那些在雞中生產(chǎn)的更好嗎？
答：生產(chǎn)抗體的過程是抗原，特異動物免疫反應(yīng)和測試的結(jié)合。如哺乳動物的保守靶標(biāo)蛋白，我們推薦使用在雞中生產(chǎn)的抗體。因為他們在進化上親緣關(guān)系更遠，且他們的免疫系統(tǒng)與保守的哺乳動物蛋白反應(yīng)更好，而這些保守哺乳動物蛋白可能不會被山羊或兔子的免疫系統(tǒng)識別。
3. 問：如果我的抗體在免疫定位試驗中成功了，是否該抗體在免疫印跡和其它的試驗中也能用呢？
答：再次強調(diào)，它取決于抗體識別蛋白質(zhì)的哪一部分和在固定后或免疫印跡后蛋白的哪一部分暴露了。如果多克隆抗體是合成肽，它能識別抗原池，如果這類抗原固定后沒有暴露，抗體將不會識別抗原。在某些情況下在緩沖液中加入6-8M尿素有助于蛋白質(zhì)的暴露。
4. 問：如何儲存抗體？
答：血清中的抗體，對于抗體這是一個非常穩(wěn)定的存儲形式。在-20℃或-70℃的血清通常可以保存多年。在一些特殊的情況下，anti-peptide抗體儲存的時間更短。短時間可以儲存在4℃。在某些情況下操作要更加小心，步在-20℃冷凍，之后放于-70℃冷凍的效果更好。
上海恒遠給出的常規(guī)建議：
① 對于較大體積的親和純化抗體，濾滅的抗體樣本和分成等份的液體避免多次凍融。
② 存儲蛋白質(zhì)的濃度在0.5-1mg/ml。
③ 檢查蛋白質(zhì)在不同儲存條件下的穩(wěn)定性，尤其是IgM。
錢經(jīng)理為客戶解說ELISA抗體的六大常見問題，齊老師對我司的售后服務(wù)贊不絕口。非常感謝吉林大學(xué)齊老師對我公司的大力支持！
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