目前，分子生物學正在并*終肯定會讓我們對整個生命科學有一個全面而徹底的認識，其對免疫測定技術發展的影響也是直接而又有效的，它使我們對以前一些難以檢測的生物活性物質的測定變得輕而易舉，并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性。

　　較早用于免疫測定的基因工程抗原是HBcAg和HBsAg，這兩種基因工程抗原的出現，較好地解決了抗HBc和HBe的測定問題。因為要從病毒本身去大量獲取這兩種純抗原較為困難，并且這一點對于難培養的病原微生物來說，如HIV、HCV和梅毒螺旋體等都有些共性。

一、HCV-ELISA

    HCV目前尚不能體外培養，只能用基因工程或化學合成方法獲取HCV結構和非結構區的各種抗原片斷，已知HCV基因組有7個功能區組成：核心、E1、E2/NS1 NS2 NS3 NS4 NS5（有分為NS5a和NS5b）區，合成抗原的優點是易于純化，特異性好，抗原抗體反應強。

二、代抗HCV-ELISA

    由美國ortho公司克隆C1003抗原幾個片斷與人超氧化物歧化酶（SOD）結合。用酵母從病毒基因組非結合區得到表達，表達為融合蛋白，亦作為包被固相載體。

    抗原組合：NS4 區二個基因片斷為NS 5-1-1和C1003

    特性：IgG抗C100在發病后數月后，才檢出，故不宜作早期診斷。

    約由20%的病人不出現抗體。IgM抗-C100急性期檢出率只有64%。

    C100的抗原性較弱，在HCV復制中，不能充分暴露宿主的免疫系統。

    特異性和靈敏性較差。

三、第二代HCV-ELISA試劑盒

    用基因重組的HCV結構蛋白與非結構蛋白抗原包被固相載體。

    抗原組合：核心區（C區）多肽C22  NS區多肽C33  C1003和NS 5-1-1

    增加C22區和C33區后，抗體出現早，有助早期診斷，提高陽性率。有利早期診斷。

    C22是早期易出現病毒血癥

四、第三代HCV-ELISA試劑盒

    人工合成多肽抗原，由36個氨基酸組成的Cp9（內殼蛋白）和19個氨基酸組成Cp10混合包被固相載體。

    抗原組合：除有C 100-3  C22  C33 外又增加了core 和NS3   NS4  NS5

    特點：

    ① core  NS3 NS5由Baculovirus 重組表達，沒有非特異性的載體，試劑特異性高，重組的蛋白經融合形成大分子抗原，利于提高檢測靈敏度。

    ② NS3 區增加了氨基酸片斷（比例十分重要）。改進了反映的靈敏度。

    ③ NS5 經優化，徐去了非特異性的區域（G-D-D）NS3  NS5是血轉化*早測得的抗體，提高了診斷的準確性。

    ④ NS4 為倆個片斷的合成多肽，去掉了非特異性反應的區域，加強了試劑的靈敏度和特異性。

五、第四代HCV-ELISA 試劑盒

    美國新近推出一種包括HCV基因組7個功能區所有免疫決定基的單一融合蛋白，稱為多決定基融合抗原，采用表面活性劑處理分界病毒表面復合物，釋放HCV核心抗原（core）并用ELISA法，靈敏度可達500拷貝/ml，已接近核酸擴增檢測水平。

    抗原組合：以Core和NS3作為主要檢測片斷（比例十分重要）加合成多肽NS4

    特點：

    ① 直接測Core抗原；

    ②不易發生變異；

    ③ 抗IgM 和IgG檢出率可達100%；

    ④ 特異性達99。8%靈敏度為100%。

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原創作者：上海恒遠生物科技有限公司