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ELISA試劑盒總結(jié)分享冰凍切片實(shí)驗(yàn)小竅門

點(diǎn)擊次數(shù)：12854 發(fā)布時(shí)間：2014/7/1 10:03:52

每一位實(shí)驗(yàn)者們都有屬于自己的科研體會(huì)和實(shí)驗(yàn)技巧中的竅門，而有的竅門可能是書本上學(xué)不到的。對(duì)于新入實(shí)驗(yàn)室學(xué)生們來說，多聽師兄師姐們的實(shí)驗(yàn)心得可以使自己更快進(jìn)入科研角色，避免走很多彎路。下面我們就來看看elisa試劑盒總結(jié)分享冰凍切片實(shí)驗(yàn)小竅門。

1、室溫下復(fù)溫30Min 0.01MPBS清洗5Min×3；

2、加入配好的0.3% TritonX100 30Min。以增加細(xì)胞的通透性，0.01MPBS清洗5Min×3；

3、5%小牛血清封閉1 h0. 01 MPBS清洗5 Min×3；

4、加入用血清稀釋液稀釋的一抗，4 ℃存放24-48 h；吸去抗體，0.01MPBS洗5Min×3；

5、加入配好的0.3%的過氧化氫甲醇溶液30Min。以消除內(nèi)源性過氧化物酶的影響，0.01MPBS清洗5Min×3；

6、加入0.01MPBS稀釋的的二抗.室溫孵育2h。0.01MKPBS洗5Min×3；

7、加入ABC復(fù)合物之類的抗體.室溫孵育2h。0.01MPBS洗5Min×3；蒸餾水迅速?zèng)_三次；

8、加入顯色液，進(jìn)行免疫組織化學(xué)顯色。時(shí)間一般不超過30Min.可不時(shí)在顯微鏡下進(jìn)行觀察，待細(xì)胞著色而背底顏色較淡時(shí)馬上吸去顯色液。用蒸餾水迅速?zèng)_三次后加入0.01MKPBS終止反應(yīng)；

9、梯度酒精脫水之后，封片、拍照。

細(xì)節(jié)將消除內(nèi)源性過氧化物酶這一步放在后面，能避免雙氧水對(duì)目的蛋白的影響。

原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司